免疫共沉澱抗体的选择,免疫共沉澱的缺点

fjmyhfvclm2025-02-02  6

小豪的回答:


可以用兔抗人的其他抗体做对照,已知不与你的目的蛋白有结合的

希望能解决您的问题。

️免疫共沉澱的缺点

北京索莱宝科技****的回答:


(1)可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用;

(2)两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥樑作用;

(3)必须在实验前**目的蛋白是什么,以选择最后检测的抗体,所以,若**不正确,实验就得不到结果,方法本身具有冒险性。

(4)灵敏度没有亲和色谱高。

免疫共沉澱:

免疫共沉澱(co-immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。

免疫共沉澱的注意事项

(1) 确保共沉澱的蛋白是由所加入的抗体沉澱得到的,而并非外源非特异蛋白,单克隆抗体的使用有助于避免汙染的发生;

(2) 要确保抗体的特异性,即在不表达抗原的细胞溶解物中新增抗体后不会引起共沉澱;

(3) 确定蛋白间的相互作用是发生在细胞中,而不是由于细胞的溶解才发生的,这需要进行蛋白质的定位来确定。

▆▆▆丈的回答:


(1)可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用;

(2)两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥樑作用;

(3)必须在实验前**目的蛋白是什么,以选择最后检测的抗体,所以,若**不正确,实验就得不到结果,方法本身具有冒险性。

(4)灵敏度没有亲和色谱高。

️免疫共沉澱两个抗体需要不同种源吗

神级人氏的回答:


不需要。或者说需要分开一个个证明。用一个抗体去做ip,然后分别用3个抗体做ib,看你抓下的蛋白是否是3个蛋白複合物。

抗体(antibody)指机体的免疫系统在抗原刺激下,由b淋巴细胞或记忆细胞增殖分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。主要分布在血清中,也分布于组织液及外分泌液中。 抗体通常由一些基础单元组成,每一个抗体包括:

两个长(大)的重链,以及两个短(小)的轻链。而轻链和重链之间以双硫键连线。轻链和重链又分为可变区和恆定区,而不同型别的重链恆定区,将会导致抗体种型的不同。

️求助,免疫共沉澱第一抗体应加多少较为合适

的回答:


不需要。或者说需要分开一个个证明。用一个抗体去做

ip,然后分别用3个抗体做ib,看你抓下的蛋白是否是3个蛋白複合物。

抗体(antibody)指机体的免疫系统在抗原刺激下,由b淋巴细胞或记忆细胞增殖分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。主要分布在血清中,也分布于组织液及外分泌液中。 抗体通常由一些基础单元组成,每一个抗体包括:

两个长(大)的重链,以及两个短(小)的轻链。而轻链和重链之间以双硫键连线。轻链和重链又分为可变区和恆定区,而不同型别的重链恆定区,将会导致抗体种型的不同。

️免疫共沉澱和gst pull down技术各有何优势

热心网友的回答:


都是用来研究蛋白质相互作用的技术

免疫共沉澱的话蛋白质是处于天然状态,蛋白质的相互作用可以在天然状态下进行,可以避免认为影响,还可以分离得到天然状态下相互作用的蛋白複合体。

但是问题是两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥樑作用;而且必须在实验前**目的蛋白是什么,以选择最后检测的抗体,如果抗体选错了就没有结果。

gst pull-down是将gst融合蛋白作为探针固化到凝胶柱上,与溶液中的目的蛋白结合。可以用来确定融合(或探针)蛋白与未知(或靶)蛋白间的新的相互作用,证实探针蛋白与已知蛋白质间可疑的相互作用。

但问题是这个方法可能会出现假阳性。也就是也许是因为电荷作用的影响造成的吸附,而不是生理性的相互作用。

️免疫共沉澱和免疫沉澱有区别嘛?

热心网友的回答:


如果说区别的话,免疫沉澱是单一的特异性抗

体结合其对应抗原,使之聚集沉澱。免疫共沉澱是a抗体结合a抗原,b抗体结合b抗原,如果a抗原能与b抗原相互作用而结合的话,最终aabb都连在一起沉澱,检测方法可以使用ab在一起激发荧光,分开无荧光,所以当检测到荧光则说明ab有相互作用,无则没相互作用,也可使a固定在固相载体,检测b,若检测到b则ab有相互作用,若没检测到则无相互作用。基本来说免疫沉澱是看有没有抗原抗体结合,免疫共沉澱则是看两个抗原有无相互作用

其实标籤就是图方便,比如你家实验室要拉100个蛋白来研究,不可能买100个抗体吧?有标籤就一支抗体解决了。另外你说的也对,自身抗体不是个个都好用的。用标籤抗体做染色质免疫共沉澱要注意什么问题 阴性 阳性对照设定 抗体特异性分析其他 如何看免疫共沉澱图 分清input和ip,再者就看用什么抗体ip。i...

免疫共沉澱是 bai为了检测目du标蛋白与其他蛋白zhi 是否相互作用dao.elisa一般方法是将目的物质专的抗体加属入,再加入能够结合该抗体的另一种被修饰的抗体,后者修饰部分是具有一种酶活性可将某种物质催化形成有色物质,因此显色阳性反应说明存在目标物质.而免疫共沉澱是将蛋白x抗体结合在固定相上,...

1 收穫细胞,加入适量细胞ip裂解缓冲液 含蛋白酶抑制剂 冰上或者4 裂解30min,12,000g离心30 min后取上清 2 取少量裂解液以备western blot分析,剩余裂解液将1 g相应的抗体和10 50 l protein a g beads加入到细胞裂解液,4 c缓慢摇。什么是免疫共...

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