南京金益柏的回答：
您的样本若是测血浆，可以将收集的样本置于含edta的lv管中，立即轻摇几次防止凝固，然后将血样转移到含抑肽酶（0.6tiu/ml血样)的离心管中，轻摇混匀，来抑制样本中蛋白酶的活性，防止您所测定的物质降解。4度离心1600g，15分钟，收集血浆，－70度储存，半年的时间可以。
若是测定血清，离体的样本（我们的做法）中加抑肽酶浓度同血浆的提取，室温条件下过夜，取上清，然后离心再取上清。－70度储存可用半年。
在这个过程中需要注意的是若elisa系统中用hrp显色，则禁止使用叠氮钠，因为其抑制酶的活性；还有就是样本不能反覆冻溶，否则效价很快下降。
️做elisa实验前，事先收集好的标本该如何处理？
宰桂枝汗媚的回答：
1、取血后最好能放到37度水浴箱中1小时左右,这样有助于纤维蛋白原凝集,在冻得时候也最好不要把血清和血细胞一起冻,血细胞反覆冻融会破碎,里面的物质很容易混到血清中,而且血清冻后再放到室温作试验,实际上血清里面会产生分层,你取得部分并不能代表血清整体情况,你做试验前血清融化后需要混匀才可以,而你带着血细胞怕不好混匀吧,所以我觉得最好不要一起冻
2、如何解冻血清才不会使产品质量受损?
我们建议您将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之溶解，然后在室温下使之全溶。但必须注意的是，溶解过程中必须规则地摇晃均匀。
3、血清解冻后发现有絮状沉澱物出现，
该如何处理?
血清在解冻过程（包括没有完全解冻）或储存在2-8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如凝集素、纤维蛋白原和玻连蛋白等）可能会聚整合团，形成絮状沉澱或外观混浊；在运输过程中，由于时间较长，所以往往有少许解冻，因此也可能稍有沉澱，但这些都不影响血清效能。若您欲去除这些絮状沉澱物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤
️做elisa检测前各样本该如何準备
南京金益柏的回答：
在收集样本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天就进行 检测的样本，及时储存在4℃备用。对于隔天再检测的样本，及时分装后冻存在-20℃备用，有条件的，最好-70℃冻存备用。
标本应避免反覆冻融。
液体类标本:
包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
1. 血清：
室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。储存过程中如有沉澱形成，应再次离心。
2. 血浆：
应根据标本的要求选择edta、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。储存过程中如有沉澱形成，应再次离心。
3. 尿液：
用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。储存过程中如有沉澱形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4. 细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。
5. 培养细胞
检测细胞内的成份时，用pbs（ph7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反覆冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。
储存过程中如有沉澱形成，应再次离心。
6. 组织标本
切割标本后，称取重量。加入一定量的pbs，ph7.4。
用液氮迅速冷冻储存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的pbs（ph7.
4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。
分装后一份待检测，其余冷冻备用。
️elisa样品準备问题
糟油酒丸的回答：
哇，大家都曾经盲目过啊，patpat振作一下。
现在的情况是恐怕你无法使用该试剂盒和你的血清样本取得适宜于发表的资料。因为即使你做这个实验，你也说不清楚你的样本里面有多少opn已经降解了，所得的测量值理论上来说不能很好的反映你需要研究的原始opn浓度。
当然，如果现在这个试剂盒买了也是买了，不用掉也是浪费，等不及把它用在其他按要求採集的血浆样本上，你还是可以拿它来做以下实验，考虑一下你自己的时间和精力，值不值得这么做吧：
1。碰碰运气--如果出于神祕的原因你的血清样本中opn没有损失或损失很小，那么你还是可以做这个实验。为了证明这一点，你可以用一个新的确定为阳性的捐献者，取血分两份，分别按照你的老办法制备血清，和按照elisa建议办法制备血浆。
然后用该试剂盒测试，对比两份样本的结果。如果结果相近，则说明你的血清製备办法不影响opn，你可以按原计划做你的实验。
但这个实验也有个问题--同样体积的全血，则opn数量固定，血清和血浆体积差异可能造成两个样本浓度不同，而且你的血浆要加pmsf，也是改变浓度的因素。所以到底最后结果相差多少视为可以接受，需要考虑一下。
同时你可以将已知浓度的重组opn(试剂盒中带来的)，加到你某个待测的血清样本中（不重要的或备有多余分量的），同未加重组蛋白的同一个样本，还有等量重组蛋白加到普通稀释缓冲液中，三组同时测试，前两个结果差值是否为计算出来的opn浓度，该差值是否与第三个结果相同。这样可以证明，在你的血清样本中，opn到底会不会降解。但这里的问题是加完到底应该孵育多久，在什么温度下孵育。
理论上应该比照你的血清样本製备过程的温度和时间。这里假定重组opn与天然opn在血清中的降解反应一样。
2。以上都是为了回答一个问题就是你的血清样本能不能用。但如果你的实验只是为了比较差异，不太在乎基準值，你还是可以不管三七二十一地就用这些样本测了。
得到的结果对你私下来分析还是有参考价值--即你还是可以知道某些病人是否opn比另外一些病人高，病人**前后opn是变高了还是变低了。但是这样有个前提是你的opn只是降解浓度变低了，没有低到测不到的地步。。。你也可能测了一通，血清样本用光光了（本来血清样本可能还可以有别的用途），啥也没测到。。。
️elisa实验血清标本不够，如何处理？50
热心网友的回答：
我想问问 你们用的什么管
是硅娇那种吗？
估计不是，如果是一般的生化管离心后 量少
你可以拿个细点的管 比如一次性滴管 倒过来离心 会得到多一些的血清
️做elisa实验需要注意一些什么？
南京金益柏生物科技****的回答：
elisa实验中应该注意的问题,包括样品稀释、试剂盒平衡、样品和试剂的混匀、加样、温育等问题,希望对你有用处.
elisa试剂盒有着準确性高、灵敏度高、特异性强的诸多优点,深受广大使用者朋友的喜爱.然而,在实验过程中,也需要注意很多问题.对此,武汉福来生物工程提醒你,需要遵守一些规则,才能更好地进行实验,取得较好的实验成果.
elisa方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定.在elisa测定中影响因素较多,在检测过程中除正常反应外,有时常见到一些错误的结果.引起elisa测定错误结果的原因主要有：
标本因素；试剂因素；操作因素.
1．样品稀释
一般产品的样品稀释倍数均通过大量试验确定,以保证试验的灵敏度和特异性.酶联免疫反应是一种敏感性很高的反应,如果血清不稀释,不可避免会产生很强的非特异性反应,出现假阳性.
2．试剂盒平衡
elisa中所有试剂和板条均应在试验前平衡至室温(约25℃),一般需在室温放置20～30分钟以上.平衡时间太短会造成试剂混匀不够,样品孵育时间相对缩短,elisa反应不够充分.冬季室温低,可将试剂盒置37℃温箱20分钟.
3．样品和试剂的混匀
在稀释前、后的样品必须充分混匀,所有试剂在加样前也须摇匀,以保证试验的均一性.
4．加样
加样是一项很重要的步骤.加样不可太快,要避免加在孔壁上部,不可溅出和产生气泡.加样太快,无法保证微量加样的準确性和均一性.加在孔壁上部的非包被区,易导致非特异吸附.
5．温育
温育是elisa测定中影响测定成败最为关键的一个因素.elisa作为一种固相免疫测定,抗原抗体的结合反应在固相上进行,要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合,必须在一定的温度条件下反应一定的时间.
6．洗板
固相免疫测定技术是一种非均相免疫测定技术,需以洗涤操作将特异结合于固相的抗原或抗体与反应温育过程中吸附的非特异成份分离开来,以保证elisa测定的特异性.洗液儘量不要溢位孔外；加洗液后要静置1分钟,甩去板孔中洗液后,一定要大力拍干；及时更换吸水纸,尤其是拍过酶标记物的吸水纸一定要弃去,否则可能影响试验结果.
7．显色
显色一定要控制时间,根据试剂盒说明操作即可.一般来说,显色时间过短,结果偏低；显色时间过长,空白增高或者非特异性显色增加.
8．比色
比色要注意波长的选择.以tmb为底物和以opd为底物的试剂盒均有使用,而前者比色波长为450nm,后者为492nm,滤光片需根据要求随时更换.因此,容易出现滤光片错用的问题.
莱特资讯科技****的回答：
1 临床标本的收集和储存
用于elisa测定的临床标本最为常用的是血清（浆）。本实验室用elisa测定乙肝两对半，甲肝，戊肝，抗hiv的标本时，在处理和储存方面要考虑以下几个方面： 1） 要注意避免出现严重溶血及血清中混有红细胞。
当标本出现严重溶血及血清中混有红细胞时，反应孔不易洗净，残留在反应孔内的血红蛋白具有过氧化物酶的活性，显色时可能造成假阳性。 2） 标本凝固不全强行离心，造成血清中含有少量的纤维蛋白原，在实验过程中形成纤维蛋白吸附在反应孔孔壁上不易洗掉，易造成假性结果。 3） 血清标本可在2～8℃下储存1周。
如血清样本需长时间储存，则需放入-20℃冰柜内冰冻储存。冰冻储存的血清标本须注意避免反覆冻融，标本可能引起假阴性结果。此外冻融标本的混匀不要进行剧烈振荡，应反覆颠倒混匀。
2 elisa 测定中试剂準备
在实验开始前，将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置20分钟以上后，再 进行测定，证试剂盒温度要和室温一致。如果把试剂盒从冰箱拿出来直接做实验会造成一些弱阳性标本的检测出现假阴性。因为在后面的孵育反应步骤中，造成孵育时间不够。
其次，elisa实验中洗板用的洗液需每日更换配製，稀释时所用的蒸馏水或去离子水应保证质量。
3 加血清样本及反应试剂
血清样本使用微量加样枪加样。使用微量加样枪加样必须注意避免以下几点： 1） 加样太快，无法保证微量加样的準确性和均一性。
需匀速加样，吸样时，加样枪需按到第一档，加样时，加样枪需直接按到底。 2） 加样应直接加入反应孔底部，加在反应孔孔壁上易溅出会对邻近孔产生汙染。儘量避免出现气泡。
3） 反应试剂的加入时先要注意试剂的有效期，再注意滴加的角度和滴加的速度。滴加太快易出现重複滴加或加在两孔之间.
4 温育的时间与温度
温育是elisa测定中最容易出现问题的步骤。温育温度应在37℃，水浴。温育时间应按照试剂说明书上的时间严格执行。
温育实际测定操作中要注意以下几点： 1）要保证在设定的温度下有足够的反应时间。温育时间不够，弱阳性样本测不出来 。
2）因为採用水浴，所以在温育时一定要封板，防止水蒸气形成水滴掉入反应孔内造成汙染，并有可能整板花板。
5 elisa测定的洗板
全自动洗板机的使用应注意以下几点： 1） 洗板前，应检查洗液瓶、蒸馏水瓶是否充足，废液瓶是否满瓶。2） 在自检过程中注意观察洗液灌注是否通畅，排液是否通畅。
3） 在洗板过程中，应注意观察反应孔每孔是否灌满且无外溢，每孔吸水是否吸尽，并且要保证洗液在孔中放置的时间。
6 elisa测定以tmb为底物的显色
加入底物开始显色反应前，最好是先检查一下底物溶液的有效期。滴入a、b显色剂后，需温育15min，最后加入终止液终止反应，振荡混匀后即可进行下面的比色测定判断结果。在此过程中应注意不要把显色剂和终止液滴入顺序弄反，否则重做实验。
7 elisa的比色测定
elisa的比色测定由酶标仪进行测定，故需强调比色测定时，一定要注意酶标仪的波长是否是双波长（450nm和630nm）。
8 elisa测定结果判定
结果判定一般是根据比色结果和肉眼观察综合判定。如在判定过程发现有些反应孔出现倒阴不阳的现象或出现不常见的模式（如乙肝两对半中出现12阳性等），需本着严谨的态度，重新複查。
对elisa测定中出现问题的可能原因（非试剂盒本身的原因），总结如下： 1)弱阳性质控样本检测不出温育的时间或温度不够；显色反应时间太短；所用配製缓冲液的蒸馏水有问题。
2）测定的重複性差 ，这是由于测定操作引起的问题，包括 ①加样本及试剂量不準；孔间不一致 ②加样过快，孔间发生汙染 ③加错样本 ④加样本及试剂时，加在孔壁 ⑤不同批号试剂盒中组分混用 ⑥温育时间、洗板、显色时间不一致 ⑦孔内汙染杂物，血清标本未完全凝固即加入，反应孔内出现纤维蛋白凝固或残留血细胞，易出现假阳性等。 3）全部孔都不显色 ① 漏加酶结合物； ② 洗板液配製中出现问题 ③ 漏加显色剂a或b ④ 终止剂当显色剂使用 4）全部板孔均有显色 ① 板不乾净 ② 显色液变质 ③ 洗板液受酶等汙染
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